TRABAJOS DE LABORATORIO

ACTIVACION Y DESNATURALIZACION DE LA ENZIMA CATALASA.

Fundamento:

La catalasa es una enzima presente en todos las células. Su acción consiste en reducir el agua oxigenada ( producto toxico para las células), convirtiéndose en agua y oxigeno molecular. Se encuentra en el interior de unos orgánulos, los peroxisomas encargados de la detoxificacion de las sustancias , muy abundantes en el higado de los animales y en los organos de reserva de vegetales, por ejemplo la patata. Su presentcia es facil de detectar y a que si se añade agua oxigenada a un tejido fresco que contenga dicha enzima se obserba la emision de burbujas de oxigeno, como resultado de la accion de la enzima.
　
Objetivos: 1. Demostrar la actividad de una enzima , la catalasa presente en la patata.
2. Demostrar como factores del medio pueden” inactivar” su funcion.–a ( verde intenso), clorofila –b( verde), carotenos( rojo –anaranjado) y xantofila ( amarillo anaranjado) en diferentes proporciones.　
Materiales: 1. Tubos de ensayo.
2. Acido clorhídrico
3. Patata
4. Agua
5. Agua Oxigenada.Técnica de la Practica:Tomamos cuatro tubos de ensayo e introducimos en ellos lo siguiente:
Tubos: 1. Introducimos un pequeño trozo de patata cruda , a temperatura normal y le añadimos 10ml de agua oxigenada comercial.
2. Introducimos la misma cantidad de patata cruda , a temperatura normal, pero previamente triturada. Añadimos 10ml de agua oxigenada comercial.
3. Introducimos la misma cantidad de patata cruda pero previamente hervida , Añadimos 10ml de agua oxigenada comercial.
4. Introducimos la misma cantidad de patata cruda pero previamente mantenida en acido clorhídrico , durante diez minutos. Añadimos 10ml de agua oxigenada comercial.
　

　

SEPARACION DE PIGMENTOS VEGETALES MEDIANTE CROMATOGRAFIA EN PAPEL.

　
MATERIALES QUE NECESITAMOS:
1. Mortero.
2. Tijeras
3. Espinacas u hojas verdes.
4. Embudo con papel de filtro
5. Tubo de ensayo en gradilla
6. Éter etílico.
7. Alcohol metilico puro.
8. Capsula de Petri o vaso de precipitados.
9. Capilar o micropipeta
10. Tira de papel cromatografico.
　
　Introducción. 　
Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con colores diferentes: clorofila
　
　
Fundamento:


Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad en disolventes apolares, lo que permite su separacion cuando una solucion de las mismas asciende por capilaridad a traves de una tira de papel poroso, dispuesta verticalmente sobre una pelicula de un disolvente organico, etanol, ya que las mas solubles se desplazaran a mayor velocidad, pues acompañaran fácilmente al disolvente a medida que este asciende. Las menos solubles avanzaran menos en la tira de papel de filtro.
Apareceran , por tanto, varias bandas de diferentes colores , que estarán mas o menos alejados de la disolución alcohólica según la mayor o menor solubilidad de los pigmentos . Estas bandas poseeran diferente grosor, dependiendo de la abundancia del pigmento en la disolución.
　
　
Técnica:
1. Colocamos en un mortero trozos de hojas lavadas ya, le quitamos las nerviaciones mas gruesas , junto con 10 o 15 cc de éter etílico.
　
2. Trituramos sin golpear hasta que el liquido adquiera una coloración verde intensa.
　
3. Filtramos en un embudo con papel de filtro y recogemos en un tubo de ensayo ( con dos o tres cc, de solucion de pigmentos).
　
4. Colocamos en la tapadera de una caja de Petri metanol absoluto hasta una altura de 0,5 a 1 cm.
　
5. Cortamos una tira de papel de filtro de unos 8cms, de anchura y unos 10 a 15 cms. , de altura.


6. Ponemos con el capilar en el papel cromatografía entre 5 y 10 gotas de solucion pigmentos , espaciadas en el tiempo con el fin de que vaya secándose el éter etílico y aumente la cantidad de pigmentos. Las gotas se podrán siempre en el mismo punto , situado a nos 2 cm por encima del borde inferior del papel.



7. Doblamos el papel cromatografico a lo largo y colocarlo en la placa de petri con la mancha de pigmento a 1 cm , de la superficie del eluyente. Podemos sustituir la placa de petri por un vaso precipitado y fijar el papel cromatografico con una pinza a un soporte horizontal colocado e el borde del vaso.

9. Esperamos unos 30 minutos y observamos.

　
　EXTRACCION DE ADN DE CELULAS ANIMALES.


 1. Higadito de pollo.
2. Mortero.
3. Pipeta.
4. Probetas
5. Alcohol etílico de 96%
6. Lavavajillas
7. Zumo de piña.
8. Papel de filtro.
9. Varillas de vidrio.
10. Embudos.

MATERIAL.
Método experimental.Trituramos un higadito de pollo en un mortero. Añadimos al triturado 100ml de agua destilada y removemos hasta hacer una especie de papilla. La papilla debe quedar opaca, nunca transparente.
Filtramos varias veces la papilla en un embudo con papel de filtro sobre una probeta. Vertimos la pasta que queda en el filtro en otra probeta y anotamos el volumen.



Añadimos una cantidad de detergente equivalente a una cuarta parte del volumen de la pasta. Removemos suavemente hasta que la pasta quede homogénea.



Añadimos 10 ml de zumo de piña y seguimos removiendo la mezcla unos cinco minutos.
Vertimos la mezcla en otra probeta mas ancha y añadimos poco a poco con una pipeta 50 ml de alcohol frío. El alcohol debe resbalar por las preces de la probeta para evitar que se mezcle con la pasta.



Dejamos reposar la mezcla sin agitar ni remover . Al cabo de unos minutos vemos que se forman dos fases: en el fondo estará el agua con las proteínas y en la parte superior estará el alcohol con ADN en forma de filamentos blancos. Sumergimos la varilla de vidrio solo en la parte del alcohol y la movemos siempre en la misma dirección hasta que los filamentos blancos se adhieran a la varilla.
Ya extraído el higado el ADN .



Añadimos azul de metileno y observa las fibras al microscopio.